自身抗体（AAb）检测具有非入侵性、抗体不易降解且可重复性高的优势，可为临床提供肿瘤免疫应答信息、分子侵袭状态，有效减少漏诊与误诊，协助临床早期癌症诊断并及时调整治疗方案。如何开展有临床转化意义的AAb研究呢？我们可以从刚刚过去的ASCO年会中寻找到部分答案，突破AAb研究困局。
在此分享年的ASCO年会上关于AAb在免疫疗效评估中的4篇临床研究结果。
Poster1：自身抗体作为免疫检查点抑制剂治疗的晚期皮肤黑色素瘤患者免疫相关不良事件的潜在生物标志物
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背景：
大多数接受免疫检查点抑制剂（ICI）治疗的患者会出现免疫相关不良事件（irAE）。目前无法使用生物标志物预测irAE的发展。在这里，我们评估了接受ICIs治疗的皮肤转移性黑色素瘤患者治疗前血清中的IgG自身抗体（AAbs）谱，以确定与irAEs相关的AAbs。
?方法：
回顾性评估了48例接受派姆单抗或纳武单抗单药治疗或37例伊匹单抗和纳武单抗联合治疗的转移性黑色素瘤患者的临床数据。研究根据CTCAE5.0标准评估irAEs。使用HuProt?微阵列v4.0评估来自85例患者的血清中的IgGAAb，该芯片涵盖23,种蛋白质（81%的人类蛋白质组）。使用无irAE组作为对照组，比较组间的AAb谱（不同程度irAE与无irAE）。将结果输入到AdvaitaBio的iPathwayGuide软件中，使用p0.05和Log2FC0.6发现显著差异表达的AAb，并确定相关的生物学途径。
?结果：
在85例患者中，60例经历了不同程度的irAE，单药治疗组48例患者中有29例（60.4%），伊匹单抗和纳武单抗联合治疗37例患者中有31例（83.8%）。我们发现种自身抗体差异升高，其中种在单药治疗组中，种在联合治疗组中。通过比较确定了在发生irAE的患者中升高的10种AAb。这些靶向蛋白质在通常受irAE影响的组织中高度表达。以前的研究表明它们与自身免疫和炎症性疾病（如皮炎和甲状腺炎）有关。通路分析显示，与自身炎症相关的RIG样受体信号通路在PD-1组（P=0.）中受到显著影响，但在联合组中没有受到影响（P=0.）。其他涉及的途径包括NOD样受体、嘌呤和D-氨基酸代谢，它们在先天免疫系统和炎症小体的组装和成熟、促炎细胞因子和促进炎症反应的介质中发挥作用。
?结论：
正在进行进一步的分析以确定irAE类型和严重程度与筛选的特定自身抗体的相关性。需要进行前瞻性研究来验证这些AAb的特异性。这种方法可用于识别irAEs高风险的患者，用于监测患者对免疫治疗药物的响应，以确定是否需要停止治疗或进一步治疗。
Poster2：接受免疫检查点抑制剂或铂类化疗的转移性尿路上皮癌患者的多重自身抗体分析?背景：
AAb谱可能会在恶性肿瘤中改变，并提供对肿瘤生物学和免疫状态的见解。我们假设接受免疫检查点抑制剂（ICI）的mUC患者的纵向AAb分析可以提供对免疫反应的见解，这可能与免疫事件相关并有助于发现新的治疗靶点。
?方法：
我们收集了来自Dana-Farber癌症研究所接受ICI或铂类化疗（PBC）的mUC患者以及年龄和性别匹配的健康对照的血清，使用了SeroTag免疫肿瘤学发现阵列（Oncimmune），量化了AAb对种抗原的反应性。使用与荧光报告染料藻红蛋白偶联的抗IgG特异性检测抗体检测结合的自身抗体。使用LuminexFlexMAP3D分析仪检测AAb水平，结果以中值荧光强度（MFI）呈现。进行微阵列的显著性分析以鉴定与匹配的健康对照（HC）相比在尿路上皮癌患者中水平升高的AA。报告了治疗前和治疗后增加1.5的AA。
?结果：
治疗前（n=66）和治疗后（n=65）血清样本来自接受帕博丽珠单抗治疗患者25例、阿替利珠单抗治疗患者21例（n=21）、纳武利尤单抗治疗患者5例、阿维鲁单抗治疗患者1，度伐利尤单抗+曲美利木单抗治疗患者1例,纳武利尤单抗治疗+疫苗治疗患者1例和接受化疗患者12例，其中顺铂治疗8例，卡铂治疗4例。全部血清用来检测AAb。治疗前后样本的中位持续时间为6个月，中位年龄为67岁，其中男性51例（77.3%）。总体而言，研究观察到患者之间AAb的显著异质性，其中37种AAb在治疗前mUC患者中表现出更高的反应性，尤其是抗CTAG1（NY-ESO-1）、CTAG2（NY-ESO-2）、MAGEB-18、KRAS、GRB2、RARRES2、HSP72和FGFR3（P0.05）。治疗前和治疗后的AAb曲线相似，每个患者都有独特的变化。值得注意的是，接受ICI的3例患者均存在抗NY-ESO-1的AAb。接受化疗的患者出现新AAb的频率较低，尽管与卡铂治疗的患者相比，接受顺铂治疗的患者出现AAb的频率似乎更高。
?结论：
这是使用人类蛋白质组芯片全面检测mUC患者中AAb情况的第一份研究报告。该研究确定了mUC患者相对于健康对照中的多个升高的AAb，最显著的是NY-ESO-1，它也在ICI治疗后的一些患者中出现。尽管顺铂和卡铂为基础的化疗之间似乎存在差异，但接受化疗的患者不会频繁出现新的AAb。
Poster3：自身抗体作为免疫检查点抑制剂治疗晚期实体瘤免疫相关不良事件的预测因子?背景：
单独使用或联合使用免疫检查点抑制剂（ICI）是许多癌症的标准治疗方法。通常免疫耐受患者容易产生免疫相关的不良事件（irAE）。没有生物标志物可用于识别更有可能发生irAE的患者。本研究的目的是评估预先存在的自身抗体、irAE的发生和生存结果之间的关联。
?方法：
我们进行了一项前瞻性研究，包括年5月至年7月期间接受ICI治疗晚期实体瘤的例患者。在ICI开始之前进行了自身抗体检测（抗中性粒细胞胞质、抗核、甲状腺过氧化物酶和甲状腺球蛋白）。分析了预先存在的自身抗体、irAE的发生、严重程度、延迟和生存结果之间的关联，包括无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）。使用T检验、Cox回归模型、单变量和多变量分析以及Kaplan-Meier方法进行统计分析。
?结果：
在例患者中，例（68%）为男性，中位年龄为66岁，ECOG评分为0或1的患者例（81%）。例（73%）接受抗PD-（L）1单药治疗，59例（27%）接受抗PD-（L）1联合治疗，所有病人中包括肾细胞癌99例（45%）和肺癌90例（41%）。总共有例（58%）患者有预先存在的抗体。IrAE在已有自身抗体的患者中更常见：阳性组患者64例（50%）与阴性组患者20例（22%），OR=3.5,（95%置信区间[CI]，1.8~6.8），P=0.。阳性组与阴性组相比，ICI开始和irAE之间的中位时间间隔更短，分别为13周和28.5周（P=0.01）。阳性组患者12例（9.4%）与阴性组2例（2%）患者经历了多重*性，OR=4.5（95%CI，0.98~36），P=0.04。免疫检查点抑制剂治疗的患者在预先存在和不存在的自身抗体组中是PFS和OS相同的。经过中位随访25个月（95%CI，19-31）后，发生irAE的患者中位PFS和OS显著延长，分别为12.6个月（95%CI，11~22.7）vs5个月（95%CI，4.2~7.0）,P=0.和30个月（95%CI，22.7~NR）vs21个月（95%CI，15~34.6）,P=0.。在多变量分析中，irAE仍然与生存结果有统计学关联，预先存在的自身抗体与生存结果无关。
?结论：
在接受ICI治疗的患者中，预先存在的自身抗体的存在与irAE的发生显著相关。在存在预先存在的自身抗体的情况下观察到早期和多种irAE。因此，这些生物标志物可以帮助识别有irAE风险的患者，并促使我们密切监测他们。
Poster4：定制自身抗体分析以预测和监测接受免疫检查点抑制剂患者的免疫相关不良事件
?背景：
使用定制的微阵列，我们之前报道了发生irAEs等级≥2的患者和未发生的患者在基线时（pre-ICI）具有不同的特定AAb的中值荧光强度（MFI）水平。利用更大的数据集，我们评估了ICI后总体基线AAb升高和AAb早期增加是否可以预测irAE，以及类固醇治疗是否可以降低AAb。
?方法：
血浆来自两项临床试验（MET4-IO，NCT和INSPIRE，NCT）的接受ICI的患者和健康对照。MET4-IO和INSPIRE研究中的收集时间点分别包括：基线、3-4周（w）、6-8w、24w和治疗结束时。针对频繁irAE定制的具有个autoAg的阵列与血浆一起孵育并用AAb检测IgG和IgM反应性。通过Student-t检验比较了每人MFI的AAb在irAEs等级≥2或irAEs等级≤2的患者和健康对照之间的差异。
?结果：
研究分析了来自例患者和14例健康对照的样本。irAEs等级≥2患者包括：甲状腺功能减退（13）、肺炎（10）、结肠炎（7）、肝炎（4）、皮肤*性（7）、输液反应（2）、胰腺炎（2）、脑膜炎（1）、垂体炎（1）、角膜溃疡（1）、高肌酐（1）、心肌炎（1）、肌炎（1）、糖尿病（1）、粘膜炎（1）、肌无力（1）和肾上腺衰竭（1）。与基线时的患者相比，健康对照的MFI的AAb较少（中位数32vs62，P0.）。发生irAEs等级≥2的患者基线时MFI的IgG高于未发生irAEs等级≥2的患者（中位数39vs33，P=0.03）。在采集23例发生irAE的患者的血浆，我们观察到基线MFI的AAb显著增加（中位数84vs77，P=0.）。在23例发生irAEs的患者中有9例患者存在类固醇治疗后的配对样本，显示类固醇治疗后的AAb较低（54vs79，P=0.）。在irAEs等级≤2的患者中，在ICI治疗前后MFI的AAb没有差异（基线与首次ICI收集后的中位数为58与60，P=0.13）。
?结论：
我们观察到在基线时MFI的IgG数量更多，并且与没有发生irAE的个体相比，在ICI给药后，有irAE的个体增加更多。类固醇治疗导致AAb减少。一项前瞻性研究正在进行中，以验证AAb在风险分层和监测irAE中的潜在作用。
总结与讨论
目前，自身抗体及其组合对于肿瘤患者病情监测、反映预后和免疫治疗效果方面的意义仍需深入探索，基于20K人类蛋白质组芯片方法的筛选方法有望推动肿瘤相关自身抗体的研究进程。除肿瘤之外，炎症、自身免疫性疾病（如：红斑狼疮、类风关、克隆氏病、多发性硬化）等多种疾病中，同样在体内产生和累积大量的自身抗体。
华盈生物提供的HuProtTM20K人类蛋白组芯片作为一款覆盖~种人类蛋白质，是自身抗体高通量筛选的利器，从而为多种疾病的诊断、预后、药效评价等提供丰富候选标志物。
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